回顾2016海狸磁珠重大应用系列专题一 2017/01/11

导读:——HIV-1整合酶抑制剂检测

回顾2016海狸磁珠重大应用系列专题一

——HIV-1整合酶抑制剂检测

       HIV-1(I型人类免疫缺陷病毒)在宿主细胞内经过逆转录得到的cDNA,由整合酶(inergrase,IN)催化插入到宿主基因组DNA中,?#38665;?#31243;称为整合过程。整合是HIV-1复制周期中不可缺少的步骤,对于病毒的复制至关重要,因此对整合酶的抑制能够有效地起到抗HIV的作用。
       目前,FDA批准的治?#21697;?#26696;以HIV-1生命周期的三个?#38181;?mdash;—融合过程、逆转录过程和蛋白水解过程为靶点。这三个靶点的抑制剂相结?#31995;?#32852;合?#21697;ǎ?#36890;常称为高效抗病毒?#21697;ǎ?#26159;目前治疗AIDS的标准方?#28014;?#23613;管这种方法能够显著的抑制HIV-1的复制,提高了感染病人的生活质量,但并不能有效治愈。而且,耐药病毒的突变株的出现,使得整个治?#21697;?#26696;受到明显的限制。因此,新的抗病毒靶点的研究对于AIDS的治疗有着重要意义。细胞辅因子LEDGF/p75对整合酶具?#24418;?#23450;作用,在LEDGF/p75缺陷的感染细胞中,整合酶很快被?#21040;猓琀IV-1的复制和感染被阻断,大量研究证明干扰LEDGF/p75的作用是抑制HIV复制感染的有效途径。
       中国医学科学院药用植物研究所和?#26412;?#21327;和医学院郭顺星和?#29616;?#38686;?#28909;?#21033;用磁性微球的生化分析方法,开发了一?#20013;?#22411;的针对于HIV整合酶和细胞辅因子LEDGF/p75之间的蛋白质相互作用的筛选方法,以鉴定HIV-1整合酶抑制剂。此外,该方法亦能够适用于FDA批准的其他1000多种PPI(protein-protein interaction)药物筛查。

该检测方法主要步骤如下图A:
a)GST-IBD与His-CCD置于微孔板中孵育结合,形成PPI复合物
b)采用镍离子螯合磁珠(BEAVER,70501)捕获PPI复合物
c)采用碱性磷酸酶(ALP)标记的GST抗体和ALP发光底物进行PPI复合物的定量检测当PPI抑制剂存在?#20445;珿ST-IBD无法形成PPI复合物,因此磁珠无法捕获GST-IBD,从而无发光信号。


图A) 采用磁珠法进行PPI复合物抑制剂检测的主要步骤:首先,GST-IBD与His-CCD置于微孔板中孵育结合,形成PPI复合物。然后,采用镍离子螯合磁珠(BEAVER,70501)捕获PPI复合物。继而采用ALP标记的GST抗体和ALP发光底物进行PPI复合物的定量检测。CCD和IBD分别是整合酶和p75蛋白?#31995;?#30456;互作用区域,当存在抑制剂?#20445;珻CD与IBD无法作用,即无发光值。

参考文献:
A Novel Assay for Screening Inhibitors Targeting HIV Integrase LEDGF/p75 Interaction Based on Ni2+ Coated Magnetic Agarose Beads. Sci Rep. 2016 May 3; 6:25375.

备注:更多关于海狸产品应用文献请参考官网http://www.bhvgv.club产品信息一栏

关于海狸

海狸公司创立于2011年底,落户在风?#38774;?#20029;的苏州工业园区独墅湖畔生物医药产业园(BioBAY)。公司以纳米磁珠技术和生物材料表面技术为核心,通过试剂开发和设备技术整合,面向生物科?#23567;?#20307;外诊断和基因检测领域,提供科研和工?#23548;?#21035;的纳米磁珠原料、蛋白?#21058;?#20013;间体、免疫磁珠、核酸提取试剂盒、辅助生物耗材及配套自动化设备等系列产品。

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